标本要求：

　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　操作步骤

　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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